創新研發
Innovative R & D
詳細信息
【名稱】
通用名：牛結節性皮膚病病毒熒光PCR檢測試劑盒(探針法)
商品名：無
英文名稱：Lumpy skin disease virus Real-time PCR test (Probe)
【用 途】
適用于動物皮膚損傷病灶、皮膚結痂、唾液、眼鼻等分泌物、奶、精液、糞便、媒介生物等樣品中牛結節性皮膚病病毒的特異性檢測。
【主要成分與含量】
| 序號 | 產品組分 | 規格 |
| 1 | LSDVPCR反應液（含探針） （棕色管） | 1管（1.2mL） |
| 2 | LSDV陽性對照 （紅蓋管） | 1管（100μL） |
| 3 | LSDV陽性對照 （綠蓋管） | 1管（100μL） |
| 4 | 使用說明書 | 1份 |
注意：不同批號的組分不互換使用，試劑盒中組分使用前需充分混勻并離心（建議采用輕彈或顛倒的方式混勻，不建議采用渦旋振蕩器混勻），應盡量避免反復凍融！
【熒光PCR儀器適用范圍】
ABI7500Fast、ABI7500、Q5等系列，Roche系列，BIO-RAD系列等熒光定量PCR檢測儀等。
1樣本前處理
①牛病料：剪取50~100mg牛病料組織，加入含500μLPBS或生理鹽水的研缽中緩慢研成勻漿，或采取組織冷凍研磨儀進行研磨，將研磨后的勻漿液轉移到無RNA酶污染的滅菌離心管中，6000rpm離心30s；取上清液備用。
②唾液、結節潰爛時產生的分泌物、奶和精液：直接取樣本6000rpm離心1min；取上清液備用。
2樣品DNA提取（樣本處理區）
取上述前處理后的樣本，按常規方法提取病毒DNA，也可采用商品化試劑盒提取病毒DNA。陰性對照參與提取，以對環境進行監控。陽性對照無需提取，直接使用。
3 PCR體系配制
3.1 取出試劑盒，從中取出實驗所需試劑，融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著的液體；
3.2 根據不同PCR儀選擇反應管或反應板，反應總體積為25μL，反應液在配液區配制，加樣在樣品處理區，測試反應體系配制如下表：
| 組分反應管 | 檢測管 | 對照管 | |
| 陽性對照 | 陰性對照 | ||
| LSDVPCR反應液（含探針） | 20μL | 20μL | 20μL |
| LSDV陽性對照 | - | 5μL | - |
| LSDV陰性對照 | - | - | 5μL |
| 樣品DNA | 5μL | - | - |
| 總體積 | 25μL | 25μL | 25μL |
4 擴增（檢測區）
按下列參數設置反應條件：
| 反應參數 | 預變溫度 | 45個循環 | |
| 變性 | 退火/延伸 | ||
| 溫度 | 95℃ | 95℃ | 58℃ |
| 時間 | 3min | 10sec | 34sec |
熒光信號采集設定在退火/延伸時。對于多通道熒光PCR儀，選擇熒光素FAM為信號采集通道，淬滅基因選None，染料校正選None。
5 結果判斷
5.1 實驗成立條件
5.1.1 陰性對照：無特異性擴增曲線或Ct值＞45.0，或無Ct值。
5.1.2 陽性對照： Ct值應＜28.0，且出現明顯的S型擴增曲線。
5.2 結果判定
5.2.1 陽性：樣品檢測結果Ct值≤40.0，而且出現明顯的S型擴增曲線，表明樣品中檢出牛結節性皮膚病病毒核酸。
5.2.2 陰性：樣品檢測結果Ct值＞45.0或無特異性S型擴增曲線，表明樣品未檢出牛結節性皮膚病病毒核酸。
5.2.3 可疑：樣品檢測結果Ct值在：40.0~45.0范圍，應對樣本進行復檢。如重復實驗結果Ct值仍在40.0~45.0范圍，有明顯指數增長，則判定為陽性，否則為陰性。
【注意事項】
1 實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書，嚴格按操作步驟執行。
2 所有試劑應在規定的溫度儲存，詳細信息見試劑標簽。
3 為了避免交叉污染，請盡可能在無核酸酶的環境下操作，并將試驗過程分區進行（試劑準備區、樣本制備區、擴增區等）。
4 配制PCR反應體系時應盡量避免氣泡產生，擴增前應檢查反應管是否蓋緊，以免反應液泄露污染儀器。
5 為保證實驗結果準確，樣品盡量保證新鮮采集，2~8℃運輸，長途運輸請使用干冰。
6 所有試劑應避免反復凍融。
【儲存條件及有效期】
試劑盒于-20℃保存，有效期為12個月。
【產品性能指標】
試劑盒采用的引物及探針與正在送審的國家標準采用的引物及探針一致。試劑盒檢測臨床樣本的最低敏感性為2拷貝/μL。
【規格】 50頭份/盒
【生產企業】 重慶澳龍生物制品有限公司
【地 址】 重慶市榮昌區板橋工業園區四支路五號
【郵 編】 402460
【技術服務】 023-46763511
【銷售熱線】 023-46761801
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